همسانه سازی و بیان ژن کد کننده ی سلوبیاز (بتاگلوکوزیداز) از باکتری سرما دوست exiguobacterium sp. sh3 در e.coli

سلولزبهعنوانفراوان ترینمادهآلیقابل تجزیه،شامل پلی مرهای خطی متشکلازواحدهایگلوکزباپیوندهایبتا 1و4گلیکوزیدیمی باشدکهمی تواندبهعنوانبهترینذخیرهبرایتولیدانرژی،غذاوموادشیمیاییموردنیازانساندرنظرگرفتهشود.هیدرولازکاملآنزیمیموادسلولزی نیازمندوجودیکسیستمپیچیده یآنزیمیوهمکاریسهآنزیممختلفاندوگلوکاناز،اگزوگلوکانازوبتاگلوکوزیدازاست.تا به امروز ژن های بتاگلوکوزیداز با ویژگی های مختلف از انواع میکروارگانیسم ها مانند مخمر، قارچ‎ ها و باکتری ها جداسازی و همسانه سازی شده اند. در پژوهش حاضر از باکتری سرمادوست sh3exiguobacterium sp.به عنوان منبعی برای استخراج آنزیم های سلولازی استفاده شد.جداسازی ژن با استفاده ازpcrو طراحی آغازگر های مناسب از باکتریsh3exiguobacterium sp. انجام شد و سپس توالی ژن تحت پیشبر t7 در باکتری اشرشیاکلی سویه ی bl21 همسانه سازی و بیان گردید. تائید بیان پروتئین همسانه سازی شده در باکتری e.coliبا روش sds-page انجام شد و تیمار های مختلف برای بررسی ویژگی ها و شرایط بهینه ی فعالیت آنزیم در نظر گرفته شد. در نهایت نتایج نشان داد که توالی همسانه سازی شده، پروتئینی 45 کیلودالتونی با خاصیت بتاگلوکوزیدازی تولید می کند. آنزیم بتاگلوکوزیداز با استفاده از دنباله های هیستیدینی اضافه شده به آغازگر ها و ستون نیکل خالص سازی شد وفعالیت آنزیم در حضور پارانیتروفنل گلوکوپیروناز (p-npg) به عنوان سوبسترا تائید شد. دمای بهینه ی فعالیت آنزیم 55 درجه ی سانتی گراد وph بهینه ی فعالیت آن 5 بود. همچنین فعالیت آنزیم در حضور cu+2 حدود 90 درصد کاهش یافت.